肝缺血(HI)小鼠模型

Mouse Model for Hepatic Ischemia (HI)

Hepatic ischemia/reperfusion; Liver ischemia

  • 編號DSI527Mu01
  • 物種Mus musculus (Mouse,小鼠) 相同的名稱,不同的物種。
  • 原型物種
  • 來源缺血再灌注肝損傷
  • 模式動物品系SPF級Balb/c小鼠,雄性,周齡為6w~8w,體重為20g-25g。
  • 實驗分組實驗分六組:正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組。
  • 實驗周期4-6 weeks
  • 建模方法1 小鼠術前12 h禁食,自由飲水。
    2 3%戊巴比妥鈉80mg/kg腹腔注射麻醉,麻醉成功后將小鼠平躺在手術臺上膠帶固定四肢,將小鼠腹部術去毛,用碘酒和75%乙醇術區消毒。
    3 取腹正中切口1cm,打開腹腔,小心分離出肝臟供血的門靜脈和肝動脈。
    4 用無創血管夾夾閉門靜脈和肝動脈,0.5min后,肉眼可見阻斷葉明顯變白,說明阻斷成功,用止血鉗夾閉皮膚切口臨時關閉腹腔,同時將小鼠放在37℃恒溫加熱墊上保溫。
    5 完成持續缺血60min后,重新打開腹腔,迅速取出血管夾,恢復缺血肝血流,0.5min左右可見缺血區肝臟由白色逐漸恢復為鮮紅色表明再灌注成功,逐層縫合腹腔肌肉和皮膚關閉腹腔,完成手術。待小鼠清醒后放回飼養室飼養,密切關注小鼠的狀態及生存狀況并做好記錄。
    4.注意事項
    1 分離肝門時用棉簽分離,可避免對肝臟的損傷
    2術前禁食有利于手術進行
    3阻斷血流要一次成功,否則會造成缺血預處理,減輕損傷程度
    4取材時鑷子不要損傷肝臟
  • 應用用于研究肝部損傷模型
  • 下載 英文說明書   中文說明書
  • 規格 每例
  • 價格 ¥ 480
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  • 肝缺血(HI)小鼠模型 產品包裝(模擬)
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  • 肝缺血(HI)小鼠模型 Fig. Analysis of Flow cytometric
  • Certificate 通過ISO 9001、ISO 13485質量體系認證

模型評價

模型評價
肝臟缺血損傷評分:
0分:無肝細胞損傷
1分:輕度損傷,特點為細胞質空泡化,病灶核固縮
2分:中度損傷,血竇膨脹,細胞溶質空泡化,細胞邊界模糊
3分:中度到重度損傷,凝固性壞死,大量血竇膨脹,紅細胞滲出到肝鎖,嗜伊紅細胞增多,中性白細胞著邊(附著于血管壁)
4分:嚴重壞死,失去肝臟結構,肝索崩解,出血,嗜中性粒細胞滲入

組織病理學

組織病理學
取肝左葉組織1.5cm×1cm×0.2cm于4%多聚甲醛溶液中固定24h后脫水,包埋,進行石蠟切片后行HE染色,tunel染色。作壞死評分。肝小葉結構嚴重破壞,網狀纖維支架塌陷,肝細胞壞死,空泡變樣,肝細胞索、肝竇充血腫脹,邊界不清,周圍有炎性細胞浸潤。

標志因子水平

生化指標檢測:分別檢測術后0h、3h、6h、12h、24h及72h小鼠鼠血清中ALT(谷丙轉氨酶)、AST(天門冬氨酸氨基轉移酶)的水平,γ-谷氨?;D移酶(GGT),總膽紅素(T-Bil),直接膽紅素(D-Bil),間接膽紅素(I-Bil),總膽汁酸(TBA)?。

流式檢測:
1. 樣本前處理
①剪碎:將消化液中的組織充分剪碎
②加入消化液:每個肝組織加入5ml消化液
③消化:37℃消化 45min
④ 中止:消化完的組織加入終濃度為10%FBS的1640 10ml,終止酶反應。
⑤過濾:將組織懸液經200目濾網過濾
⑥洗滌:收集單細胞懸液至于50ml EP管中,2000rpm 離心10min。
⑦疊層:用小鼠淋巴細胞分離液疊層處理
⑧ 收細胞:吸取位于中間的透明細胞層,FACs buffer 離心洗滌細胞一次。

2. 流式染色:
①FcR封閉:加入1% FcR 阻斷劑(anti CD16/32 antibody),每樣本100ul。4℃ 孵育30min,FACs buffer 離心洗滌。
②樣本表面抗體工作液:
配置混合抗體工作液,每樣本100ul;
加入抗體工作液后,4℃ 孵育避光30min,FACs buffer 離心洗滌。
PerCP anti-mouse CD11b
PE/Cy7 anti-mouse Ly-6G
FITC anti-mouse CD45
PE anti-mouse F4/80

3.樣本胞內染色:
加入固定破膜液50ul,用槍頭輕柔吹打重懸,室溫避光45min。完成后,加入1x perm/wash buffer洗滌。
4.染色完成,重懸細胞:
樣本染色完成(每樣本使用200ul FACs buffer重懸),4℃ 避光保存,待上機。
5.流式上機:
上機樣本,收集總數目50萬/細胞。

統計學分析

應用SPSS軟件進行統計分析,計量資料以均數±標準差(x ±s)表示,采用t檢驗,組間比較采用單因素方差分析,P<0.05表示有顯

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